相关栏目：
  1. 生化试剂盒
  2. 其它系列
  • 辅酶Ⅱ NADP(H)含量检测试剂盒(WST显色法)可见分光光度法

  • JLC-E9391

    CoenzymeⅠNAD(H) Content Assay Kit (WST colorimetry)

产品订购
产品货号生化试剂盒货期 优惠价 数量
JLC-E9391 -50T/24S 50T/24S 准现货 询价
看了又看以下产品
  • 产品信息

英文名称 ：CoenzymeⅠNAD(H) Content Assay Kit (WST colorimetry)
产品包装 ：盒装
产品规格 ：50T/24S
储存条件 ： -20℃
检测方法 ： 可见分光光度法
有 效  期 ：6个月
产品组成：

试剂名称

规格

保存条件

试剂酸性提取液

液体15 mL×1 瓶

2-8℃保存

碱性提取液

液体15 mL×1 瓶

2-8℃保存

试剂一

液体30 mL×1 瓶

2-8℃保存

试剂二

粉剂×1 支

-20℃保存

试剂三

液体12mL×1 瓶

2-8℃保存

试剂四 A

粉剂×1 支

-20℃保存

试剂四 B

液体 10mL×1 瓶

2-8℃保存

试剂五

液体 70 mL×1 瓶

2-8℃保存

NADP标准品

粉剂×1 支

-20℃保存

NADPH标准品

粉剂×1 支

-20℃保存

溶液的配制：
1 、 试剂二：临用前加入12mL蒸馏水充分混匀，溶解后2-8℃保存4周。
2 、 试剂四：临用前将试剂四A溶解到试剂四B中，分装保存，避免反复冻融， -20℃保存4周。
3 、 NADP标准品：临用前加入1.27 mL蒸馏水， 即5 µmol/mL ，-20℃可以保存2 周。
4 、 NADPH标准品：临用前加入1.2 mL蒸馏水， 即5 µmol/mL ，-20℃可以保存2 周。
产品说明：
辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NADP+和NADPH含量测定可以计算 NADP(NADPH + NADP+)含量和NADPH/NADP+比值，其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。 NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一，而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。

分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和 NADPH。NADPH通过PMS的递氢作用，使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒，570nm下检测吸光值，从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原 NADP+为NADPH，从而检测NADP+含量。




注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅，研钵/匀浆器、超声破碎仪，可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1、血清(浆)中NADP+ 和 NADPH的提取：
NADP+ 的提取：取血清(浆)体积(mL)：酸性提取液体积(mL)为1:5- 10的比例，(建议取0.1mL血清(血浆)，加入0.5 mL酸性提取液)，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g ， 4℃离心10min；取200μL上清液，加入200μL碱性提取液使之中和； 混匀，10000g 4℃离心10min，取上清,冰上待测。
NADPH的提取：取血清(浆)体积(mL)： 碱性提取液体积(mL)为1:5- 10的比例， (建议取0.1mL血清(血浆)，加入0.5 mL碱性提取液)，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g ， 4℃离心10min；取200μL上清液， 加入200μL酸性提取液使之中和； 混匀，10000g 4℃离心10min，取上清,冰上待测。
2、组织中NADP+ 和NADPH的提取：
NADP+ 的提取： 建议取0.1g 组织质量，加入0.5mL酸性提取液，冰浴研磨，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g ， 4℃离心10min；取200μL上清液， 加入200μL碱性提取液使之中和；混匀，10000g 4℃离心10min，取上清,冰上待测。
NADPH的提取：建议取0.1g组织质量，加入0.5 mL碱性提取液，冰浴研磨，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g，4℃离心10min；取200μL上清液，加入 200μL酸性提取液使之中和；混匀，10000g 4℃离心10min，取上清,冰上待测。
3、细胞或细菌中NADP+ 和 NADPH 的提取：
NADP+ 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，离心弃上清，建议500万细胞或者细菌加入0.5mL酸性 提取液，超声波破碎(冰浴， 功率200W，超声3s，停10s，重复30次)，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)， 冰浴冷却后，10000g ， 4℃离心0min；取200μL上清液，加入200μL碱性提取液使之中和；混匀，10000g 4℃ 离心10min，取上清,冰上待测。
NADPH的提取：建议500万细胞或者细菌加入0.5mL碱性提取液，超声波破碎(冰浴，功率200W ， 超声3s，停10s，重复30次)，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g ，4℃离心10min； 取200μL上清液， 加入200μL酸性提取液使之中和；混匀， 10000g 4℃离心10min，取上清,冰上待测。

相似产品
返回顶部 微信咨询 021-54720761 021-54720761 点我QQ咨询 点我QQ咨询