谷氨酰胺(Gln)活性试剂盒分光法/24样
测定意义
谷氨酰胺(Gln)是蛋白质合成的重要组成部分,在生物体内主要以游离态和结合态两种状态存在,游离谷氨酰胺在机体代谢过程中起着重要作用,同时也是三羧酸循环中α-酮戊二酸的主要来源,在能量代谢中发挥重要作用,可通过糖酵解和三羧酸循环途径参与能量的产生与供应。
测定原理
游离谷氨酰胺在谷氨酰胺酶的催化作用下转变为谷氨酸,谷氨酸脱氢酶催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+,在1-mPMS作用下,WST-8能够与NADH反应生成水溶性Formazan,产物在450 nm处具有特征吸收峰,根据吸光值变化即可定量检测谷氨酰胺的含量。
需自备仪器和用品
台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵和蒸馏水。
试剂盒组分与配制
提取液:液体30 mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体1mL×1支,-20℃避光保存。使用时分装冻存,避免反复冻融。
试剂二:液体1mL×1支,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加入5mL蒸馏水混匀溶解,分装冻存,避免反复冻融。
试剂四:液体2mL×1瓶,-20℃避光保存。分装冻存,避免反复冻融。
试剂五:液体1.5mL×1瓶,-20℃避光保存。
试剂六:液体1.5mL×1瓶,-20℃避光保存。
试剂七:液体30mL×1瓶,4℃保存。
标准品:粉剂×1瓶,4℃避光保存。
预实验的意义
比色法检测试剂盒预实验非常重要
1、确定该试剂盒是否适合客户的样本检测,以免造成试剂盒和样本的浪费(比如低表达处理的样本);
2、熟悉生化试剂盒的操作流程,尤其是初次使用生化试剂盒测定;
3、确定样本的处理方法及稀释倍数是否合适;
4、了解实验过程中可能出现的实验现象或问题,以便于及时作出调整;
5、通过3-5组预实验,判断试剂盒对于样本的适应稀释浓度范围,指导实验样本稀释比例。
注意
正式测定前务必取 3 - 5 个预期差异较大的样本做预测定。