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  • 辅酶Ⅱ NADP(H)含量检测试剂盒(WST显色法)微量法

  • JLC-E9390

    CoenzymeⅠNAD(H) Content Assay Kit (WST colorimetry)

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JLC-E9390 -100T/48S 100T/48S 准现货 询价
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  • 产品信息

英文名称　： CoenzymeⅠNAD(H) Content Assay Kit (WST colorimetry)
产品包装　： 盒装
产品规格   ： 100T/48S
储存条件   ： -20℃
检测方法   ： 微量法
有 效  期   ： 6个月
产品组成：

试剂名称

规格

保存条件

酸性提取液

液体25 mL×1瓶

2-8℃保存

碱性提取液

液体25 mL×1瓶

2-8℃保存

试剂一

液体10 mL×1瓶

2-8℃保存

试剂二

粉剂×1 支

-20℃保存

试剂三

液体4mL×1瓶

2-8℃保存

试剂四 A

粉剂×1支

-20℃保存

试剂四 B

液体10mL×1瓶

2-8℃保存

试剂五

液体25 mL×1瓶

2-8℃保存

NADP标准品

粉剂×1 支

-20℃保存

NADPH标准品

粉剂×1 支

-20℃保存

溶液的配制：
1 、 试剂二：临用前加入4mL蒸馏水充分混匀，溶解后2-8℃保存4周。
2 、 试剂四：临用前将试剂四A溶解到试剂四B中，分装保存，避免反复冻融， -20℃保存4周。
3 、 NADP 标准品：临用前加入1.27mL蒸馏水，即5µmol/mL ，-20℃可以保存2周。 
4 、 NADPH 标准品：临用前加入1.2 mL 蒸馏水，即5 µmol/mL ，-20℃可以保存2 周。
产品说明：
辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NADP+和 NADPH含量测定可以计算 NADP (NADPH + NADP+)含量和 NADPH/NADP+比值，其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。 NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一，而且在 PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
分别用酸性和碱性提取液提取样品中 NADP+和NADPH。在1-mPMS作用下，WST- 1可与NADPH反应，产生水溶性formazan，在450nm下有特征吸收峰， 而NADP+可被 6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为NADPH，进一步采用WST- 1检测。


           
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、研钵/匀浆器、超声破碎仪， 可调式移液器、微量玻璃比色皿 /96孔板、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1、血清(浆)中NADP+和 NADPH的提取：
NADP+的提取：取血清(浆)体积(mL)：酸性提取液体积(mL)为1:5- 10的比例，(建议取 0.1mL血清(血浆)，加入0.5 mL酸性提取液)，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g ， 4℃离心10min；取 200μL上清液， 加入200μL碱性提取液使之中和； 混匀，10000g 4℃离心10min，取上清,冰上待测。
NADPH的提取：取血清(浆)体积(mL)： 碱性提取液体积(mL)为1:5- 10的比例， (建议取 0.1mL血清(血浆)，加入0.5 mL碱性提取液)，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g ， 4℃ 离心10min；取200μL上清液， 加入200μL酸性提取液使之中和； 混匀，10000g 4℃离心10min，取上清,冰上待测。
2、组织中NADP+和 NADPH的提取：
NADP+ 的提取：建议取0.1g组织质量，加入0.5mL酸性提取液，冰浴研磨，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g ，4℃离心10min；取200μL上清液， 加入 200μL碱性提取液使之中和；混匀，10000g 4℃离心10min，取上清,冰上待测。
NADPH 的提取：建议取0.1g组织质量，加入0.5 mL碱性提取液，冰浴研磨，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g ，4℃离心10min；取200μL上清液， 加入200μL酸性提取液使之中和；混匀，10000g 4℃离心10min，取上清,冰上待测。
3、细胞或细菌中NADP+和 NADPH的提取：
NADP+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，离心弃上清，建议500万细胞或者细菌加入0.5mL酸性提取液，超声波破碎(冰浴，功率200W，超声3s，停10s，重复30次)，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴冷却后，10000g ，4℃离心10min；取200μL上清液，加入200μL碱性提取液使之中和；混匀，10000g 4℃离心10min，取上清,冰上待测。
NADPH的提取：建议500万细胞或者细菌加入0.5mL碱性提取液，超声波破碎(冰浴，功率200W，超声3s，停10s，重复30次)，煮沸5min(盖紧，以防止水分散失)；冰浴冷却后，10000g，4℃离心10min； 取200μL上清液， 加入200μL酸性提取液使之中和；混匀，10000g 4℃离心10min，取上清,冰上待测。

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