• 蛋白质游离巯基含量检测试剂盒微量法
  • JLC-E9338

    Protein Disulfide Bond Content Assay Kit

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JLC-E9338 -100T/48S 100T/48S 准现货 询价
  • 产品信息

英文名称 :Protein Disulfide Bond Content Assay Kit
产品包装 :盒装
产品规格 :100T/48S
储存条件 :2-8℃
检测方法 :微量法
有 效  期 :6个月
产品组成:

试剂名称

规格

保存条件

提取液一

液体 40mL×1瓶

2-8℃保存

提取液二

液体40mL×1

2-8℃保存

试剂一

液体120mL×1瓶

2-8℃保存

试剂二

液体20mL×1瓶

2-8℃保存

试剂三

液体7mL×1瓶

2-8℃保存

试剂四

液体1mL×1

2-8℃保存

标准品

粉剂×1 支

2-8℃保存

溶液的配制:
1、提取液配制:临用前根据样本量按照提取液一:提取液二=1mL:1 mL 进行配制,请勿一次性全部混合。 
2、若试剂二有析出,可置于37℃水浴加热至澄清透明后使用。
3、标准品:10mg还原型谷胱甘肽(GSH)。 临用前加入1.3mL蒸馏水配置成25μmol/mL ,2-8℃保存4周。 
4 、0.125μmol/mL标准品配制:取50μL 25μmol/mL标准品,加入950μL蒸馏水,充分混匀,配制成1.25μmol/mL
的标准品;然后取100μL1.25μmol/mL标准品,加入900μL蒸馏水,充分混匀,配制成 0. 125μmol/mL的标准品备用,现配现用。
产品简介 :巯基的存在使得蛋白质能够进行二硫键的形成,从而维持分子的稳定性和功能性。此外,巯基还参与到氧化还原反应中,具有重要的生物学作用。在细胞内,巯基含量的变化与多种疾病的发生和进展密切相关,因此巯基也成为了生物医学领域中的重要研究对象。本试剂盒测定的是蛋白质中的游离巯基含量。一定条件下巯基会发生亲核反应,即巯基与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸(DTNB)反应,生成黄色化合物,在412nm处有最大吸收峰,据此可以计算蛋白质游离巯基含量。



注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低温离心机、研钵/匀浆器、丙酮(AR)、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量)
1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液, 冰浴匀浆后于4℃ , 3000rpm  离心10min ,弃上清。在沉淀中加入2mL试剂一,搅匀后溶解沉淀,沉淀溶解液 作为样本进行实验。(注:(1)植物叶片等纤维含量较高的样本, 溶解沉淀后4℃ 3000rpm离心3min ,取上清 作为样本进行实验,;(2)加入试剂一后会有大量气泡产生, 请缓慢加入,建议使用5mL的EP管)。
2. 细菌/细胞: 按照细菌/细胞数量(10⁶个):提取液体积(mL)为5~10:1的比例(建议5百万细菌/细胞加入1mL  提取液),冰浴超声波破碎(功率200W,超声3秒, 间隔10秒, 总时间3min)后,于4℃ , 3000rpm  离心10min, 弃上清。在沉淀中加入2mL试剂一,搅匀后溶解沉淀,沉淀溶解液作为样本进行实验。(注:(1)若沉淀溶解 不完全, 可4℃  3000rpm离心3min ,取上清作为样本进行实验;(2)加入试剂一后会有大量气泡产生,请缓 慢加入,建议使用5mL的EP管)。
3. 血清/血浆、牛奶等液体:取100μL液体样本加入0.9mL丙酮,4℃ , 3000rpm  离心10min ,弃上清。在沉淀中 加入2mL试剂一,搅匀后溶解沉淀,沉淀溶解液作为样本进行实验。(注: 若测定数值偏小, 可改变样本与丙 酮的比例, 如取0.2mL液体样本加入0.8mL丙酮或0.3mL液体样本加入0.7mL丙酮,注意同步修改计算公式)。

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