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  • JLC-E9334

    Pyridoxal HPLC Assay kit

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JLC-E9334 -50T/48S 50T/48S 准现货 询价
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  • 产品信息

英文名称 ：Pyridoxal HPLC Assay kit
产品包装 ：盒装
产品规格 ：50T/48S
储存条件 ：-20℃
检测方法 ：高效液相色谱法
有 效  期 ： 6个月
产品简介：
吡哆醛（pyridoxal ,PL）是维生素B6的组成成分之一，是氧化吡哆醇所得到的醛，广泛存在 于肉类、谷类、蔬菜及坚果中。吡哆醛在生物体内主要的活性辅酶形式是磷酸吡哆醛（PLP），是 转氨酶、脱羧酶、消旋酶等多种酶的辅酶。
吡哆醛在一定条件的光激发下具有荧光效果，可以利用高效液相色谱法荧光检测器测定其含 量。荧光检测器灵敏度较高，常用于痕量分析。
试验中所需的仪器和试剂：
高效液相色谱仪（Polaris C18-A 色谱柱（4.6 ×250 mm），荧光检测器（FLD））、台式离心机、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管（1.5 mL）、针头式过滤器（水系）、注射器、抽滤器、滤膜 （水系、有机系）、棕色进样瓶、超纯水、甲醇（色谱纯）。
产品内容：
提取液：液体 30 mL × 1 瓶，4℃保存；本提取液中含有不溶物，需摇匀后使用。
试剂一：液体 5 mL × 1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 1.5 mL × 1 瓶, 4℃保存。
试剂三：粉剂×2 瓶，4℃保存。
标准品：粉剂× 1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 0.821 mL 蒸馏水配制成5 mg/mL  吡哆醛标准 溶液，4℃密封保存，避免阳光直射。
实验前准备工作：
1. 将 1 瓶试剂三溶解到1000mL超纯水中，再加入 0.55 mL 的试剂二，混匀，得到流动相 A。
2. 将1000 mL配制好的流动相 A 、甲醇（色谱纯）用滤膜抽滤。（配制好的流动相A采用0.22 µm水系滤膜抽滤，甲醇采用0.45µm有机系滤膜抽滤）。
3. 将抽滤好的流动相超声20 min ，除去气泡。
4. 标准品的配制： 将5 mg/mL的吡哆醛标准溶液采用倍比稀释的方法分别用蒸馏水稀释成 16000ng/mL 、3200 ng/mL 、640 ng/mL 、128 ng/mL 、25.6 ng/mL 的吡哆醛标准溶液。（标准品浓度 仅供参考，可根据实际样品浓度进行调整）。4℃避光保存（密封），测试前采用水系针头式过滤 器过滤到棕色进样瓶内，待测。
操作步骤：
一、吡哆醛的提取：(可适当调整待测样本量)
组织样本：按质量（g）:提取液体积（mL）1:5~ 10 比例，建议称取 0. 1 g 样本（新鲜样本：剪 碎；烘干样本：研磨过筛），加入 0.6 mL 提取液（新鲜样本需匀浆），密封，混合均匀，置于 60℃ 水浴锅中浸取 30 min。冷却至室温，加入 0. 1 mL 试剂一，0.3 mL 蒸馏水，混匀，静置 2 min 。10000rpm 离心 10 min ，取上清液（若仍有浑浊，可再次离心），测试前采用水系针头式过滤器过滤到棕 色进样瓶内，待测（若上清液颜色过深或者浓度过高，可稀释后再次过滤待测）。
细胞：按细胞数量（10⁴ ）:提取液体积（mL）1000~5000 万:1 比例，建议取 5000 万细胞，加入 0.6 mL 提取液，超声破碎细胞（功率 20% ，超声 3s ，间歇 9s ，重复 30 次，总时间：6 min），密封 混匀，置于 60℃水浴锅中浸取 30 min 。冷却至室温，加入 0. 1mL试剂一，0.3 mL蒸馏水，混匀， 静置 2 min 。10000 rpm 离心 10 min ，取上清液（若仍有浑浊，可再次离心），测试前采用水系针头 式过滤器过滤到棕色进样瓶内，待测。

血清：按血清体积（mL）:提取液体积（mL）1~5:1 比例，建议取 0.5 mL 血清，加入 0. 1 mL 提 取液，密封混匀，置于 60℃水浴锅中浸取 30 min 。冷却至室温，加入 0. 1 mL 试剂一，0.3 mL 蒸馏 水，混匀，静置 2 min 。10000 rpm 离心 10 min ，取上清液（若仍有浑浊，可再次离心），测试前采 用水系针头式过滤器过滤到棕色进样瓶内，待测。

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