CCK-8试剂盒(细胞增殖及毒性检测试剂盒)
CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）是一种基于WST-8的快速、高灵敏度细胞活性检测的试剂盒，广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性甲臜化合物。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同种类型细胞，颜色深浅与细胞数量在一定限度内呈线性关系。
本试剂盒为即用型溶液，无需再行配制，可直接用于96孔板细胞实验，省略了细胞洗涤与收集等步骤。该试剂盒可用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
制作标准曲线
1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2.按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3.接种后培养至细胞贴壁，然后加CCK-8溶液培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。
4.根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。）
细胞活性检测
1. 在96孔板中接种细胞悬液（100µL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（在37℃，5% CO2的条件下）。
2. 向每孔加入 10µL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
3. 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4. 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5. 如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10µL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮盖培养板在室温条件下避光保存。在24小时内吸光度不会发生变化。
注意事项：
1. 本试剂颜色应为粉红色，如果发现溶液变黄应弃用。
2. 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液。
3.本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。
4. 建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间，白细胞可能培养时间较长。
5. 当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1000个/孔 (100µL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500 个/孔 (100µL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
6. 如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450nm检测灵敏度最高。
7. 培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
021-54720761
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