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PCR试剂盒
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蜂房蜜蜂球菌(欧洲蜂幼虫腐臭病)PCR试剂盒
英文名：蜂房蜜蜂球菌(欧洲蜂幼虫腐臭病)PCR试剂盒

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产品信息

蜂房蜜蜂球菌(欧洲蜂幼虫腐臭病)PCR试剂盒
产品及特点：
蜂房蜜蜂球菌（Melissococcus pluton）是引起欧洲幼虫腐臭病（Europeanfoulbrood，简称 EFB）的病原菌，该菌单个的形态为披针形，常结成链状或成簇排列，直径 0.5μm~1.0μm，是一种革兰氏阳性菌，但有染色特性不稳定性，有时候可能为革兰氏阴性菌，兼性厌氧。由于欧洲幼虫腐臭病是急性、毁灭性传染病，能导致蜜蜂幼虫的大批死亡，最终导致整个蜂群的灭亡，危害巨大，其中中蜂发病比意蜂更严重，我国也是主要的疫区之一。该病具有传播迅速、发病快的特点，是蜜蜂的主要病害。农业部和质检总局联合制定的最新的《中华人民共和国进境动物检疫疫病名录》将其列为二类传染病。世界动物卫生组织（OIE）也将其列为检疫对象，因此蜂房蜜蜂球菌快速检测具有重要的意义。本试剂盒就是为此目得根据 PCR 原理开发，
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增蜂房蜜蜂球菌（欧洲蜂幼虫腐臭病），与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	蜂房蜜蜂球菌（欧洲蜂幼虫腐臭病） PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	蜂房蜜蜂球菌（欧洲蜂幼虫腐臭病） PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

规格及成分：
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂：
样品 DNA。
使用方法：
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 蜂房蜜蜂球菌（欧洲蜂幼虫腐臭病） PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置RT-PCR反应(40 μL 体系)：
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2 个样品管	PCR 阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
蜂房蜜蜂球菌（欧洲蜂幼虫腐臭病） PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 阴性对照（水）	--	18μL	--
PCR 阳性对照（蜂房蜜蜂球菌（欧洲蜂幼虫腐臭病）PCR阳性对照1000倍稀释液）	--	--	18μL

4.按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应35个循环	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。

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