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ELISA试剂盒标准品和待测样本
时间: 2022-04-19 09:25:02
      酶联免疫吸附试验(ELISA)自问世以来,以其敏感性高,特异性强,操作简便 安全,开创了免疫学诊断的新纪元在临床诊断方面得到了广泛的应用.但是ELISA试剂盒在它的研究 生产及使用中常常会碰到非特异性显色问题,ELISA试剂盒特异性 检验标本中含酶标记物的干扰物,操作不当等因素都会导致这样的结果.本文就在实验过程中产生的一些原因及如何采取一些措施,消除非特异性显色作以分析.

实验步骤:

使用前应将试剂盒的所有组分和待检样本温度恢复到室温。强烈建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。

1.按前述试剂准备项准备好各种试剂。
2.计算检测样本所需酶标条,将酶标条从铝箔袋取出,剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口,低温保存。
3.洗板:用1×洗涤缓冲液(300μL/孔)洗板三次,拍干酶标板。洗板对试验结果有重要影响,确保最后一次拍板没有洗液残留。
4.样本孵育:加入标准品和待测样本,100μL/孔,确保15分钟内完成点样,室温孵育2小时。
5.洗板:弃去孔中液体,加入1×洗涤缓冲液(300μL/孔)洗板三次,拍干酶标板。
6.酶标检测抗体孵育:将预先配制至工作浓度的检测抗体加入酶标板中,100μL/孔,混匀,室温孵育1小时。
7.洗板:弃去孔中液体,加入1×洗涤缓冲液(300μL/孔)洗板三次,拍干酶标板。
8.显色:将预先配制的底物液加入酶标板中,200μL/孔,混匀,室温避光孵育20分钟。
9.终止:加入50μL/孔终止液至酶标板中,轻轻震动酶标板至显色均匀。
10.读值:20分钟内读取450nm的光吸收值。
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