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    乙型肝炎病毒前基因组RNA RT-PCR试剂盒

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乙型肝炎病毒前基因组RNA RT-PCR试剂盒
产品及特点:
乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)是一种 RNA 病毒,会引起乙型病毒性肝炎,是一种以肝脏病变为主的传染病。临床上以食欲减退、恶心、上腹部不适、肝区痛、乏力为主要表现。部分患者可有黄疸发热和肝大伴有肝功能损害,有些患者可慢性化,甚至发展成肝硬化,少数可发展为肝癌,对人体生命健康造成严重损害,本产品根据 PCR 原理开发,可用于科研领域快速检测乙型肝炎病毒前基因组 RNA。
1. 一站式,用户不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2. 根据乙型肝炎病毒前基因组RNA的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。
规格及成分:

编号

成分

规格

试剂一

5×双酶一管式 RT-PCR Buffer

200 μL(橘黄盖)

试剂二

MMLV-Taq Mix

75 μL(红盖

试剂三

超纯水

1 mL(亮黄盖)

试剂四

乙型肝炎病毒前基因组RNA RT-PCR 引物混合液

100 μL(白盖)

试剂五

乙型肝炎病毒前基因组RNA RT-PCR 阳性对照

1×10E8 /μL)

50 μL(黄盖)

试剂六

使用手册

1 份

注:为避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供专一的DNA 片段作为阳性对照。 
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。
自备试剂:
样品 RNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备: 
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL乙型肝炎病毒前基因组RNA PCR阳性对照的 1000 倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。
二、设置RT-PCR反应(20 μL 体系): 
3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分:

成份

N+2 个

样品管

RT-PCR

阴性对照

RT-PCR

阳性对照

5×双酶一管式RT-PCR Buffer

4 μL

4 μL

4 μL

乙型肝炎病毒前基因组RNA RT-PCR 引物混合液

2 μL

2μL

2μL

N+2 个制备的 RNA 样品

12.5μL

--

--

超纯水

--

12.5μL

--

乙型肝炎病毒前基因组RNA RT-PCR 阳性对照的 1000倍稀释液

--

--

12.5μL

MMLV-Taq Mix

1.5 μL

1.5 μL

1.5 μL

4.上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:

过程

温度

时间

逆转录

42℃

30 min

预变性

95℃

5 min

PCR反应35个循环

95℃

30 sec

58℃

30 sec

72℃

20 sec

延伸

72℃

7 min

三、电泳检测: 
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物,则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现,才有必要分析样品的实验结果,如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。 

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