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ELISA试剂盒实验操作分析如下
时间: 2023-03-29 10:30:34
ELISA试剂盒质量保证是一个复杂的过程, 许多重要的环节都影响到检测的质量。
1、方法学的影响
ELISA试剂盒测定模式包括以下几种: 双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM 抗体捕捉法、竞争抑制法, 其中竞争抑制法因受操作时差所引起的bi公平竞争等因素的影响, 结果重复性较差, 质量较难控制。
2、样本因素

标本干扰因素包括内源性干扰因素和外源性干扰因素,前者包括类风湿因子、补体、异嗜性抗体、自身抗体、溶菌酶等, 后者包括标本溶血、标本被污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、冷冻标本的反复冻融等。其中外源性干扰因素是我们在检测过程中可以避免也是必须避免的因素, 而避免内源性因素的干扰则主要通过选择合适的试剂盒。在临床中遇到少见的疑难病例时应当考虑到内源性干扰因素的存在。

以下对外源性干扰因素进行简要说明:

标本溶血 要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团, 其具有类过氧化物的活性, 因此, 在以辣根过氧化物酶(ho rseradish peroxidase,HRP) 为标记酶的ELISA 测定中, 如果血清标本中血红蛋白浓度较高, 则其就很容易在温育过程中吸附于固相, 从而与后面加入的底物反应显色。
3、试剂因素

ELISA试剂盒的选择检测的原理均基于抗原抗体反应。由于该反应过程受多种因素的影响, 如普遍存在基质效应、交叉反应等, 因而检测结果难以溯源, 不同方法、不同试剂之间甚至同一试剂不同批号间结果均缺乏可比性。试剂质量在很大程度上决定了检测的水平, 因此在引入新项目之前必须对试剂进行严格的评估。

ELISA试剂盒的评估有以下几个步骤:

(1)、确定开展该项目的必要性;
(2)、了解该项目现有的检测方法和原理;
(3)、在了解试剂的组成基础上选择多家试剂盒进行比较,判断标准先选参考方法或参考物质, 其次为临床的满意度及权机构的报告如各级室间质量评价、CDC 报告等;
(4)、定期对检测结果进行追踪反馈直至最终认可该试剂。
4、操作因素对ELISA试剂盒结果的影响
ELISA试剂盒测定一般遵循以下步骤: 固相包被→加样品→温育→洗涤→加酶结合物→温育→洗涤→加底物→温育→显色→终止显色→比色。
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